威泰克分子生物学仪器
威泰克分子生物学仪器

石家庄扩增仪经销商-诚信互利

发布时间:2019-09-22 08:39:40

石家庄扩增仪经销商-诚信互利aq19e

引物Tm值的计算方法:20nt以下:Tm=2x(A+T)+4x(G+C)。20nt以上:Tm=85+0.41x(G+C%)-600/nt(nt:引物的碱基数)。引物用量:0.1~0μM,通常可以0.2μM起始,根据体系不同调整用量。

Hotton等人也报道了另一种制备T-vector的方法。他们使用脱氧核苷酸末端转移酶在切成平端的载体DNA的3''末端加上一个胸苷。由于末端转移酶可以催化多个碱基(ddTTP)作为底物,使平端载体DNA的两个3''末端各加上一个T。石家庄扩增仪经销商。

石家庄扩增仪经销商

正反向引物之间应避免配对碱基,尤其是3’端的三个碱基,否则易生成引物二聚体(Primerdimer)。两条引物的Tm值应尽量接近,好相差不超过5oC。

但每循环一次仍需加入新酶。1988年Saiki等从温泉中分离的一株水生嗜热thermusaquaticus中提取到一种耐热DNA聚合酶。此酶具有以下特点:耐高温,在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%,在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%,在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。石家庄扩增仪经销商。

石家庄扩增仪经销商

他也因此通过了博士资格考试。要知道,连的教授要想在《自然》周刊上发表文章都很不容易啊。穆里斯另一个毫不掩饰的爱好是女人,这也给他的生涯带来许多转折。他不停地变换着女人,同时也变换着工作。

但由于Klenow酶不耐热,在DNA模板进行热变性时,会导致此酶钝化,每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期,给PCR技术操作程序添了不少困难。

扩增产物滞留在加样孔中。有可能是由于模板量过高而导致PCR结果产生了高量的DNA胶状物。建议将链结果至少稀释100倍再进行二次扩增。另外,在二次PCR时使用的退火温度如果比引物的Tm值低5℃,可以将退火温度适当增高或进行热启动以提高特异性。石家庄扩增仪经销商。

石家庄扩增仪经销商

PCR技术神奇就神奇在以下几个特点上:被扩增的DNA所需量小,理论上讲一个就可以用于扩增了;扩增效率高,目的的量成指数形式扩增,几个小时就扩增1000万倍以上。

该酶后来被应用于PCR技术中,是PCR技术操作简便易行,得以推广应用重要的因素之一。Mullis设想出聚合酶链反应过程---“高速公路”的启示:1983年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis在在美国乡村“高速公路”的启发下设想出了“简单而优雅”聚合酶链反应过程。

下面给大家详细的讲讲。非特异性条带的出现,其原因:引物与序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关。

转载请注明来源:http://www.35ff.com/xinxi/detail-39702048.html


QQ咨询

电话

微信

进入官网